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本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，适合从血浆、血清和其它无细胞体液等样品中分离纯化病毒的DNA或者RNA，本试剂盒特别加入了Carrier RNA，可以从体系中轻松捕获微量核酸，具有方便快捷、产量高、重复性好的特点。所得病毒基因组DNA或RNA无蛋白、核酸酶或其它杂质的污染，可直接用于PCR、酶切、杂交、反转录等分子生物学实验。本试剂盒操作简单、快速，1h内即可获得高纯度DNA或RNA。用于各种病毒DNA/RNA核酸提取，如HCV、HIV、HPV、动物致病性病毒等。

• 快速纯化得到高质量病毒DNA和RNA。
  
• 重复性强，产量高。
  
• 无有机抽提或乙醇沉淀。
  
• 完全去除污染物和抑制剂，方便下游应用。

• 所有的离心步骤均在室温下进行（15～25℃）。
  
• 将样品平衡至室温。
  
• 试剂盒中提供的RNase-Free离心管（1.5mL）供第13步洗脱步骤使用，其余离心管需自备。
  
• 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

• 向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μL RNase-Free ddH2O，将Carrier RNA彻底溶解，得到终浓度为1μg/μl的溶液，并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中，置于-20℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液，该溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3次。
  
• 注意Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于缓冲液GB中，必须先溶解在RNase-Free ddH2O中，再溶解至缓冲液GB中。
  
• Carrier RNA工作液：根据样品的数量计算所需缓冲液GB和Carrier RNA溶液的体积（见表1或使用以下公式计算），将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀，即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。
  如果需要提取大量的样品，可根据以下公式计算：
  n×0.22mL =y ml
  y ml×28μL/ml=z μl
  n=同时提取的样品个数，y=需要加入缓冲液GB的体积，z=需要加入Carrier RNA溶液的体积。
  表1：步骤3中Carrier RNA工作液的配制：
  

  样品个数	GB（ml)	Carrier RNA水溶液（μl)
  1	0.22	6.2
  2	0.44	12.3
  3	0.66	18.5
  4	0.88	24.6
  5	1.1	30.8
  6	1.32	37
  7	1.54	43.1
  8	1.76	49.3
  9	1.98	55.4
  10	2.2	61.6
  11	2.42	67.8
  12	2.64	73.9
  13	2.86	80.1
  14	3.08	86.3
  15	3.3	92.4
  16	3.52	98.6
  17	3.74	104.7
  18	3.96	110.9
  19	4.18	117
  20	4.4	123.2
  21	4.62	129.4
  22	4.84	135.5
  23	5.06	141.7
  24	5.28	147.8

  
  注意：请将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀，即得到Carrier RNA工作液；为避免溶液出现起泡现象，请勿使用涡旋振荡。

• 用移液器将20μL Proteinase K加入一个干净的1.5mL离心管中。
  
• 向离心管中加入200μL血浆/血清/淋巴液（样品需平衡至室温）。
  
  • 如果样本体积小于200μL，可加入0.9% NaCl溶液补充。
• 加入200μL Carrier RNA工作液（为缓冲液GB与Carrier RNA溶液的混合液，配制方法如表1或按照公式计算）。盖上管盖，涡旋振荡15sec混匀。
  
  • 为了保证裂解充分，样品和Carrier RNA工作液需要彻底混匀。
• 在56℃孵育15min。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
  
• 加入250μL无水乙醇，此时可能会出现絮状沉淀。盖上管盖并涡旋振荡15sec，彻底混匀。在室温（15～25℃）放置5min。
  
  • 如果周围环境高于25℃，乙醇需要再在冰上预冷后再加入。
• 简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
  
• 仔细将离心管中的溶液和絮状沉淀全部转移至RNase-Free吸附柱CR2（吸附柱放在收集管中），盖上管盖，8000rpm （~6000×g)离心1min，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
  
  • 如果吸附柱上的液体未能全部离心至收集管中，请加大转速，延长离心时间至液体完全转移到收集管中。
• 小心打开吸附柱盖子，加入500μL溶液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），盖上管盖，8000rpm （~6000×g)离心1min，弃废液，将吸附柱放回收集管。
  
• 小心打开吸附柱盖子，加入600μL溶液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），盖上管盖，静置2min，8000rpm （~6000×g)离心1min，弃废液，将吸附柱放回收集管。
  
• 重复步骤9。
  
• 小心打开吸附柱盖子，加入500μL无水乙醇，盖上管盖，8000rpm （~6000×g)离心1min，弃废液。
  注意：乙醇的残留可能会对后续实验造成影响。
  
• 将吸附柱放回收集管中，12000rpm （~13400×g)离心3min，使吸附膜完全变干，弃废液。
  
• 将吸附柱放入一个RNase-Free离心管（1.5mL）中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置3min，使吸附膜完全变干。向吸附膜的中间部位悬空滴加20～150μL RNase-Free ddH2O，盖上盖子，室温放置5min。12000rpm （~13400×g)离心1min。
  
  • 确保洗脱液（RNase-Free ddH2O）在室温平衡后再使用。如果加入洗脱液的体积很小（小于50μL)，为了将膜上的DNA/RNA充分洗脱下来，应注意将洗脱液加到膜的中央位置。洗脱体积可以根据后续的实验要求灵活处理。